新型阳离子聚合物非病毒载体介导野生型p53基因体外转染效果的研究

作者：王伟; 王玉; 王若宁; 徐苏颖; 丁杨; 周建...尿刊酸修饰的壳聚糖野生型p53基因转染人肝癌细胞系细胞周期阻滞

摘要：目的：研究新型阳离子聚合物非病毒载体———尿刊酸修饰的壳聚糖（UAC）介导野生型p53（wt-p53）基因体外转染人肝癌细胞系HepG2的效果。方法：载体UAC包裹含绿色荧光蛋白（GFP）报告基因和wt-p53治疗基因的质粒（pEGFP-p53）转染HepG2细胞,利用流式细胞术和荧光显微术检测细胞内GFP的表达,优选最佳转染条件;采用RT-PCR法检测细胞内p53mRNA的表达,流式细胞术评价基因转染对细胞周期的影响,Western blot法检测细胞内p53及其下游细胞周期调控蛋白的表达。结果：在低pH（pH=6.9）条件下,采用低壳聚糖分子量（20000）的UAC作为载体,与pEGFP-p53形成高N/P（N/P=30）的UAC/pEGFP-p53复合物转染HepG2细胞,可获得最佳转染效果;载体UAC介导wt-p53基因转染细胞后,p53mRNA表达水平明显上调,G0/G1期出现显著阻滞,p53、p21和Rb蛋白表达水平明显上调,cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显下调。结论：载体UAC可成功介导wt-p53基因转染HepG2细胞,并诱导其产生细胞周期阻滞。

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