作者：黄美贤 廖华aanatl6细胞ptargettm载体apa微囊
摘要：目的：构建pTARGET^TM-AANAT真核表达载体并转化L6成肌细胞，检测目的基因的表达；制备pTARGET^TM AANAT转基因细胞微囊，初步探讨AANAT转基因细胞微囊的生物活性。方法：RT-PCR技术扩增大鼠AANAT cDNA，酶切连接pTARGET^TM载体，脂质体法转染L6细胞并检测pTARGET^TM-AANAT的基因表达产物；将高表达活性的L6细胞进行APA微囊化处理，倒置显微镜观察微囊形态，Western—blot检测囊内细胞AANAT蛋白表达活性。结果：酶切、DNA测序及凝胶电泳检测结果证实，pTARGET^TM-AANAT真核表达载体构建成功。转染后的L6细胞表达AANAT mRNA，胞浆中能检测到AANAT蛋白的表达。转染细胞微囊体外存活良好，微囊外形完整无粘连，大小较均一，囊内细胞清晰可见，体外培养两周后破囊检测证实囊内细胞具有AANAT蛋白表达活性。结论：pTARGET^TM-AANAT真核表达载体在L6细胞中成功表达，转染细胞微囊体外存活良好，囊内细胞具备AANAT蛋白表达活性。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
