作者：蔡志宇; 曲延征; 欧阳奇明; 黄晓晶; 陈泽...表皮生长因子受体酪氨酸激酶结构域人肿瘤细胞体外转染
摘要：目的：探讨在人肿瘤细胞中稳定表达EGFR-TKD的方法。方法：采用磷酸钙共沉淀基因转染技术，将已构建的pEF-BOS/GST-EGFR-TKD质粒DNA与pBabe-puro质粒DNA共同导入体外培养的人非小细胞肺癌细胞系H1299中。加入嘌呤霉素，对转染的细胞加压筛选，以获得成功转染的细胞。免疫荧光法对重组质粒在H1299中的表达水平及定位进行检测。结果：经嘌呤霉素筛选，8d后对照组细胞全部死亡。转染组部分细胞存活，形成单克隆集落，经多次传代培养后，荧光显微镜下观察见多数集落的细胞胞质内表达GST-EGFR-TKD。结论：通过磷酸钙共沉淀法可成功转染H1299细胞，获得稳定表达EGFR-TKD的人肿瘤细胞。
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