作者：刘汝银; 彭晓艳; 岳宗进; 冯仲锴; 王新立...四环素桂枝加葛根汤髓核细胞细胞增殖大鼠
摘要：目的：探讨四环素（TET）联合桂枝加葛根汤（CK）对髓核细胞增殖和蛋白聚糖（aggrecan）、Ⅱ型胶原蛋白（type Ⅱ collagen，Col2a）、基质金属蛋白酶13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）表达的影响。方法：体外分离培养8周龄健康雄性SD大鼠髓核细胞并进行鉴定。然后用药物处理分离成功的髓核细胞：TET组分别应用不同浓度（5，10，15，20，25μg/ml）的TET处理，CK组分别应用低、中、高剂量TET处理，TET＋CK组应用20μg/ml TET和中剂量CK处理，对照组不添加药物。采用CCK8方法检测不同药物处理组细胞增殖活力；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测TET＋CK组髓核细胞的aggrecan、Col2a、iNOS和MMP-13的mRNA表达量，免疫印迹（Western blot）检测Aggrecan、Col2a、iNOS和MMP-13的蛋白表达量。利用pcDNA3.1-CMV（＋）构建重组质粒pcDNA3.1-iNOS，转染组用pcDNA3.1-iNOS转染髓核细胞，应用20μg/ml TET和中剂量CK处理，空载体组用空载体（pcDNA3.1）转染细胞，应用20μg/ml TET和中剂量CK处理，对照组不添加药物且不转染，应用qRT-PCR检测各组iNOS和MMP-13的mRNA表达量，Western blot检测各组iNOS和MMP-13的蛋白表达量。结果：分离培养的髓核细胞Col2a和Aggrecan免疫组织化学染色阳性细胞比例分别为96%和98%。不同浓度TET或CK处理髓核细胞后细胞活力与对照组比较无显著性差异（P〉0.05）。20μg/ml TET和中剂量CK联合作用后髓核细胞的活力、Aggrecan和Col2a的mRNA和蛋白表达量均较对照组显著性升高（P〈0.05），iNOS、MMP-13的mRNA和蛋白表达量较对照组显著性下降（P〈0.05）。转染pcDNA3.1-iNOS重组质粒后髓核细胞iNOS和MMP-13的mNRA和蛋白表达与对照组和空载体组均显著性升高（P〈0.05）。结论：TET联合CK可促进髓核细胞增殖，增加髓核细胞Aggrecan和Col2a mRNA和蛋白的表达，同�
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