细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶B细胞表位的预测及鉴定

作者：闫帅; 严萍; 莫筱瑾; 徐斌; 张颋; 胡薇; ...细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶b细胞表位预测诊断抗原

摘要：目的 预测及鉴定细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶（Echinococcus granulosus lactate dehydrogenase,Eg LDH）的B细胞表位,为研制敏感性和特异性强的棘球蚴病诊断方法奠定基础。方法 通过ESPript 3.0在线网站和IEDB软件对Eg LDH的二级结构、β转角、表面可及性、柔韧性、抗原性、亲水性、线性表位等参数进行预测,筛选出具有潜在优势的B细胞表位区域;选取合适的B细胞表位进行体外多肽段合成;通过ELISA方法对合成的B细胞表位进行诊断效能评价,分别检测棘球蚴病患者血清、囊尾蚴病患者血清和健康者血清,评价敏感性、特异性和交叉反应性。用囊液抗原作为对照。结果Eg LDH二级结构中α螺旋占37.16%,β-折叠占9.67%,无规则卷曲占53.17%,存在4个跨膜区。筛选获得7个潜在的B细胞表位区域。体外合成了4个氨基酸长序列的B细胞表位PP-1（215~228）、PP-2（189~200）、PP-4（79~89）和PP-7（21~33）,ELISA结果显示,4个B细胞表位PP-1、PP-2、PP-4和PP-7对棘球蚴病患者血清的敏感性分别为52.9%（18/34）、61.8%（21/34）、82.3%（28/34）和50%（17/34）,PP-4与PP-1、PP-2和PP-7的敏感性差异有统计学意义（χ~2=8.100、5.143、9.091,均P〈0.05）,囊液抗原的敏感性为91.1%（31/34）,与PP-1、PP-2和PP-7的差异有统计学意义（χ~2=9.600、5.780、10.530,均P〈0.05）,与PP-4的差异无统计学意义（χ~2=0.444,P〉0.05）;对健康者血清的特异性分别为100%（21/21）、100%（21/21）、95%（20/21）和95%（20/21）,囊液抗原的特异性为95%（20/21）,与PP-1、PP-2、PP-4和PP-7的差异无统计学意义;对囊尾蚴病患者血清的交叉反应性分别为：0、1/10、2/10和2/10,囊液抗原的交叉反应性为5/10。结论 EgLDH的B细胞表位PP-4对棘球蚴病患者血清有较强的敏感性和特异性,有望成为潜在的诊断抗原。

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