常见嗜尸性蝇类蛹壳样品在种属分子鉴定中的应用

作者：李学博 宁淑华 张贵芹 余红丽 王清山 李...嗜尸性蝇类蛹壳种属鉴定

摘要：目的探讨常见嗜尸性蝇类蛹壳样品在法医昆虫学种属鉴定中的应用价值。方法收集不同保存时间的嗜尸性蝇类成虫及其羽化后的蛹壳成套样品共55套,根据形态学特征鉴定为2科6属8种。以不同保存时间,将上述样品分为〈2年组（n=23）、2-5年组（n=20）和〉5年组（n=12）。取单个成蝇胸部和空蛹壳,以十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法提取各样品mt DNA,并测定其浓度和纯度。PCR扩增COⅠ基因,获得COⅠ基因序列Ⅰ和Ⅱ,分别截取498 bp和841 bp的序列。在Gen Bank数据库对所获序列作BLAST搜索,进行同源性比对分析。结果所有样品均成功提取了mt DNA。保存时间≤5年的成虫胸肌和〈2年的空蛹壳DNA浓度多在1.0-3.0μg/μl之间,A260/A280值多在1.6-1.8之间。保存时间〉5年的成虫胸肌和≥2年的空蛹壳DNA浓度多低于1.0μg/μl,A260/A280值多低于1.6。随着样品保存时间的延长,各样品DNA浓度均明显下降（P〈0.01）。保存时间〈2年,成虫胸部样品和空蛹壳样品均成功扩增出COⅠ序列Ⅰ和序列Ⅱ。随着保存时间的延长,扩增成功率明显下降,序列Ⅱ表现更为明显（P〈0.01）。8种嗜尸性蝇类COⅠ基因序列Ⅰ和序列Ⅱ分别有6个和7个种属的同源性比对结果完全正确且样品序列比对的Max ident值均〉97%。结论嗜尸性蝇类空蛹壳样品可作为mt DNA提取和种属比对的检材。

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