华支睾吸虫ATP合酶b亚基的组织和亚细胞定位

作者：胡旭初 周红娟 胡凤玉 马长玲 赵俊红 黄...华支睾吸虫atp合酶b亚基免疫组织化学亚细胞定位靶向序列

摘要：目的 了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基（CsATP-synt_B）的虫体组织定位，并以HeLa细胞为替代模型观察其亚细胞定位。 方法 用CsATP-synt_B重组蛋白免疫SD大鼠，取其抗血清对华支睾吸虫成虫石蜡切片进行间接免疫荧光染色，观察CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫组织中的分布。根据生物信息学预测的CsATP-synt_B线粒体转运序列（MTS序列）和核定位序列（NLS序列）位置，设计4组引物[CsATP-synt_B全长序列，以及3个缺失突变体（MTS-缺失线粒体转运序列、NLS-缺失核定位序列、MTS-NLS-线粒体-核定位双缺失）引物]，扩增出全长基因和3个突变体基因，构建重组质粒pEGFP-N1-CsATP-synt_B^1-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B^30-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B^（1-238）＋（257-300）及pEGFP-N1-CsATP-synt_B^（30-238）＋（257-300）。将这些重组质粒用阳离子脂质体转染HeLa细胞，48 h后用激光共聚焦显微镜观察CsATP-synt_B全长基因和3个突变体在HeLa细胞的表达和亚细胞定位。 结果 CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫中分布较为广泛，主要分布在腹吸盘、卵巢、卵黄腺和皮层。绿色荧光蛋白GFP表明CsATP-synt_B全长序列表达于线粒体或细胞核，线粒体转运序列缺失突变体表达于细胞核，核定位序列缺失突变体表达于线粒体，双缺失突变体仅表达于胞浆。 结论 CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫的分布与线粒体的分布一致，主要集中在能量代谢较旺盛的组织部位。CsATP-synt_B蛋白既可进入线粒体，也可进入细胞核，理论预测的定位序列得到证实。

注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社