华支睾吸虫F0—ATP合酶b亚基基因的克隆表达和重组蛋白的免疫原性分析

作者：周红娟; 胡旭初; 胡凤玉; 徐劲; 马长玲; ...华支睾吸虫基因克隆原核表达免疫原性

摘要：目的对华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基（CsF0-ATP—synt_B）基因进行克隆、表达及重组蛋白的免疫原性分析。方法以华支睾吸虫成虫cDNA文库中含有Fn—ATP合酶b亚基基因的质粒为模板，扩增该基因（去除线粒体靶向序列的成熟肽基因），将其克隆到原核表达质粒pET-28a（＋）中，转化大肠埃希菌B121（DE3），异丙基硫代-B—D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达，经亲和层析获得的纯化表达产物免疫SD大鼠，制备抗血清。蛋白质印迹（Western blotting）分析重组蛋白的免疫原性。结果华支睾吸虫F0—ATP合酶b亚基成熟肽基因的编码区含813个碱基，编码271个氨基酸，相对分子质量（Mr）为31171．9。经亲和层析获得的重组蛋白可被其免疫的大鼠血清识别。结论华支睾吸虫F0—ATP合酶b亚基基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达。

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