作者:朱玉; 宿世杰; 苏丁泽阳; 高阳; 刘丹丹; ...毒害艾美耳球虫camk裂殖子表达
摘要:在前期分析比较毒害艾美耳球虫第二、三代裂殖子和配子体的转录组时,发现基因代号为ENH00078000的钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)基因呈差异表达。为了研究毒害艾美耳球虫钙调素依赖性蛋白激酶(EnCaMK)的功能,研究首先人工合成了该基因,构建pET-28a-EnCaMK表达载体,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,并进一步分析EnCaMK在毒害艾美耳球虫第二、三代裂殖子和配子体中的表达情况。结果显示:重组蛋白大小为48 ku左右,以包涵体形式为多,能被组氨酸(His)单克隆抗体特异性识别和鸡抗毒害艾美耳球虫多克抗隆抗体血清识别;用抗重组蛋白的鼠多克隆抗体在第三代裂殖子和配子体蛋白中检测到35 ku左右的EnCaMK条带,且在第三代裂殖子中表达量较高,显示差异表达。研究结果为进一步研究EnCaMK的酶活性与功能奠定了基础。
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