作者：陈基明; 张文; 赵长润; 何怡宁; 王海勇; ...c型禽偏肺病毒基因sybrgreen荧光实时定量pcr
摘要：根据GenBank发表的禽偏肺病毒（aMPV）F基因序列，设计一对特异性引物，建立C亚型aMPV的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法。对该反应体系进行条件优化，建立了标准曲线，并进行特异性、敏感性及重复性试验，然后将建立的方法应用于临床样品和攻毒样品的检测。结果显示：标准曲线循环闽值与模板浓度呈现良好的线性关系；建立的方法只能检测出C亚型aMPV，最低可以检测到0．8×10^1拷贝机L的核酸模板，重复性试验的变异系数小于4％。应用建立的方法对43份临床样品检测，结果显示均为阴性；对42份35日龄SPF鸡人工感染后1-21d的气管和肺脏样品进行检测，结果显示攻毒样品均为阳性。因此，研究建立的特异、灵敏、重复性好的C型aMPV实时荧光定量PCR方法，既可适合于该病的早期诊断和流行病学调查，又为该病毒的致病机制研究提供技术支撑。
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