作者:施少华; 程龙飞; 傅光华; 陈红梅; 万春和...禽坦布苏病毒e基因沙门菌鞭毛嵌合表达
摘要:利用PCR方法从禽坦布苏病毒和肠炎沙门茵分别扩增出E基因和鞭毛基因保守片段(FlicAC和FlicDB),随后通过over—lappingPCR方法将FlicAC片段、E基因和FlicDB片段依序串联后获得FlicAC—E—FlicDB目的片段,克隆到pMD18-T载体中获得重组质粒pMD-FlicAC—E—FlicDB.经BamHI和HindⅢ双酶切后接入pET-32a栽体,构建原核表达重组质粒pET—FlicAC—E—FlicDB。表达质粒转化入感受态细胞BL21(DE3)后,经IPTG诱导后表达出FlicAC—E—FlicDB嵌合蛋白,Western—blot鉴定证实与预期融合蛋白一致。
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