作者:莫毅 梁方方 陈月凤 江如兰 叶健 谢丹尼卵泡抑素基因rna干扰小发夹rna
摘要:摘要目的:构建人卵泡抑素(FS)基因短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,并瞬时转染方式初步鉴定其干扰效果。方法:依据GenBank数据库提供的人Fs基因mRNA核苷酸序列,利用Ambion网站上siRNA软件设计shRNA干扰靶序列,将该序列克隆到线性化的pLKO.1质粒载体上,构建pLKO.1-FS—shRNA重组质粒,并进行酶切和测序鉴定。确认质粒构建成功后,用脂质体(LipofectamineTM2000)将重组质粒瞬时转染3AO人卵巢癌细胞系,并用实时定量反转录PCR法检测重组质粒对FS基因的表达抑制效果。结果:构建的shRNA序列经DNA测序证实与设计序列完全一致;实时定量反转录PCR结果显示pLKO.1-FS—shRNA重组质粒瞬时转染的3AO人卵巢癌细胞后,细胞中的Fs基因转录受到抑制,抑制率达59%。结论:成功构建了靶向人Fs基因的shRNA干扰靶序列重组质粒(PLKO.1-FS—shRNA),转染后对人卵巢癌细胞系Fs基因的表达具抑制效果,该实验为进一步研究Fs基因的生物学功能奠定基础。
注:因版权方要求,不能公开全文,如需全文,请咨询杂志社