作者:万虹 熊承良 覃颖sirna支持细胞阳离子脂质体转染
摘要:目的:观察化学合成siRNA阻断大鼠支持细胞内源性基因表达的可行性,并优化转染条件。方法:体外取SD大鼠睾丸,分离、培养支持细胞,应用化学合成的不同浓度siRNA在阳离子脂质体Lipofectamice TM 2000介导下转染原代支持细胞。RT—PCR检测大鼠支持细胞中GAPDHmRNA水平的变化,MTT法检测支持细胞的活性。结果:转染终浓度为150nmol/L的siRNA能特异性有效的阻断GAPDH基因的表达,细胞毒性随浓度提高而增强,终浓度为200nmol/L的siRNA对细胞有明显毒性。结论:siRNA能在大鼠支持细胞内启动RNA干扰,150nmol/L的siRNA能特异有效地阻断内源基因表达并保持较高的细胞活性。
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