作者：陈娟; 谢丽华; 李生强; 许惠娟; 陈赛楠; ...心肌营养素样细胞因子1mg63细胞基因表达
摘要：目的探讨hsa-miR-655通过靶向调控心肌营养素样细胞因子1（cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1）基因表达,对人成骨肉MG63细胞系增殖、护骨素（osteoprotegerin,OPG）和核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）表达的影响。方法通过hsa-miR-655慢病毒转染MG63细胞进行功能获得实验。实验分阴性对照组（NC组）和hsa-miR-655过表达组（OE组）,荧光显微镜和流式细胞术（flow cytometry analysis,FCM）评估转染效率,Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞增殖能力,FCM检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测hsa-miR-655、CLCF1、OPG和RANKL mRNA的水平,蛋白质印迹法（Western blot）检测CLCF1、OPG及RANKL蛋白的变化。结果荧光显微镜和FCM显示对照组和miR-655过表达组感染效率为80%以上;qRT-PCR结果显示,相对于对照组,过表达组MG63细胞hsa-miR-655表达上调,差异有统计学意义（P=0.0004）;CLCF1 mRNA水平未见明显变化（P=0.0986）;过表达组OPG（P=0.0384）、RANKL（P=0.0007）mRNA均有所上调,差异具有统计学意义（P〈0.05）;Western blot结果显示,过表达组CLCF1蛋白水平表达下调（P=0.0053）;与对照组比较,过表达组OPG（P=0.0021）、RANKL（P=0.0002）蛋白均上调,而OPG/RANKL比值却降低（P=0.0078）,差异具有统计学意义（P〈0.05）;CCK-8细胞增殖实验结果显示,miR-655过表达后抑制MG63细胞增殖;FCM检测细胞周期结果显示,miR-655过表达后MG63细胞G0/G1期细胞比例增加,S期减少,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论hsa-miR-655通过负调控CLCF1基因的表达,抑制MG63细胞的增殖,下调OPG/RANKL的比值。
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