作者：万雷; 黄宏兴; 黄红; 柴生颋; 张志海; 魏...dkk1sost沉默基因重组腺病毒mg63细胞
摘要：目的构建Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1（DKK1）、骨硬化蛋白Sclerostin（Sost）基因沉默重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性和钙离子浓度影响作用。方法设计出特异性针对DKK1、Sost和无关对照序列（Scr）,构建DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,用qPCR法和蛋白印记（Western blot）法选出沉默效率最好的扩增DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,并用荧光显微镜观察计算病毒滴度。MG63细胞被分成空白对照组、沉默DKK1（Ad-sh DKK1）组、沉默Sost（Ad-shSost）组、沉默DKK1＋Sost（Ad-shDKK1＋Ad-shSost）组4组,分别用优选出的沉默效率最好的shDKK1和shSost腺病毒载体转染MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT）检测观察细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度。结果①DKK1 pAd-sh DKK1-1和Sost pAd-GFP-shRNA-2沉默效率最高;②与空白对照组对比,沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默DKK1＋Sost组的细胞光吸收值（OD）、ALP活性测定值均升高,而钙离子浓度均降低,以沉默DKK1＋Sost组变化最明显,组间比较具有统计学差异（P〈0.01和P〈0.05）。结论 DKK1、Sost沉默可促进MG63细胞增殖、提高ALP活性,降低钙离子浓度,尤以二者同时沉默时的作用最强。
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