三重PCR鉴定消毒牛奶及其加工环境中的单核细胞增生李斯特菌

作者：曾海燕; 张晓峰单核细胞增生李斯特菌iap基因hly基因三重pcr污染牛奶

摘要：目的 建立三重PCR体系用于鉴别消毒奶及其加工环境中的单核细胞增生李斯特菌。方法 以李斯特菌属细菌中共有的编码P60蛋白的iap基因和单核细胞增生李斯特菌特有的编码溶血素的hly基因为靶目标设计引物，用于三重PCR扩增。结果 李斯特菌属细菌的iap基因在二重PCR的扩增片断为1．45kb，单核细胞增生李斯特菌溶血素的hly基因的扩增片断为420bp；在三重PCR体系中单核细胞增生李斯特菌除了扩增到420bp的hly基因片断以外，iap基因以700bp的小片断取代了1．45kb的大片段，而同属的其他细菌仍旧扩增iap基因1．45kb的大片段。结论 所建立的三重PCR法能扩增出李斯特菌属细菌的预期条带，此方法对肉汤培养物的检测灵敏度为3．2×10^1 cfu／ml，对人工污染牛奶的检测灵敏度为1．4×10%2cfu／ml。高水平L．innocua（10^8cfu／m1）共存不影响单核细胞增生李斯特菌的特异性检出。三重PCR还可以直接鉴别出培养3～6小时后的含有单核细胞增生李斯特菌（1．45×10^0～1．45×10^1 cfu／m1）的牛奶。

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