作者：阳运康; 林月秋; 汤逊; 蔡培强hbdnf基因克隆重组逆转录病毒载体质粒bdnf基因真核表达重组质粒限制性酶切分析全长编码序列大肠杆菌菌株真核表达载体
摘要：目的构建PLEGFP-BDNF真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及移植治疗作准备.方法按照hBDNF基因全长编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出744bp的hBDNF基因片段,插入到PMD18-T载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株,获得PMD18T-BDNF克隆,对该克隆进行 限制性酶切分析和DNA序列测定;从阳性克隆中获取hBDNF全长编码片段,与真核表达载体PLEGFP质粒连接,构建PLEGFP-BDNF真核表达重组质粒.重组质粒转化大肠杆菌JM109,再经氨苄LB培养基筛选,酶切,PCR与测序鉴定.结果PLEGFP-BDNF重组逆转录病毒构建成功.结论hBDNF在大肠杆菌中的成功表达在转基因治疗CNS病变方面具有潜在应用价值.
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