作者：赵学军 国果 修江帆 吴建伟 陶如玉家蝇克隆实时荧光表达模式
摘要：目的 对家蝇伴侣蛋白CCTη（MD-CCTη）基因进行序列分析,克隆其c DNA序列并检测家蝇CCTη基因的表达情况。方法 采用表达序列标签（EST）测序技术从已构建的家蝇幼虫c DNA文库中筛选MD-CCTη基因,对其进行序列测定和分析;提取家蝇3日龄幼虫RNA,逆转录c DNA为模板,PCR扩增,并与p MD-19T载体连接,转化大肠杆菌DH5α中;采用实时荧光PCR技术分析MD-CCTη基因在家蝇不同生长发育阶段及3日龄幼虫组织中表达模式。结果 MD-CCTη基因开放阅读框（ORF）全长1 632 bp,编码543个氨基酸,理论分子量59.3 k Da,等电点6.27;该基因推导的氨基酸序列与其他昆虫同源序列比较有较高的相似性（93%）,聚类分析结果显示,家蝇与地中海实蝇和果蝇的亲缘关系最近（100%）;MD-CCTη在发育阶段以卵期表达量最高,其次为1日龄幼虫,雄性成虫表达量最低;MD-CCTη基因在家蝇3日龄幼虫组织中气管表达量最高,其次为唾液腺,在体壁中表达量最低。结论成功克隆出MD-CCTη基因的c DNA序列,MD-CCTη在家蝇不同发育阶段及组织中表达模式存在明显差异。
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