作者：黄江 胡旭初 徐劲 余新炳 包怀恩 郎书源 ...亚洲牛带绦虫基因克隆原核表达
摘要：目的对亚洲牛带绦虫成虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因（glutathione S—transferase，GST）进行克隆、表达和免疫学初步分析研究，为深入研究其生物学功能提供依据。方法将亚洲牛带绦虫成虫26kDaGST克隆到原核表达质粒pET-30a（＋）中，在大肠埃希菌BL-21／DE3中用异丙硫代-B-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达，表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）进行鉴定．用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化，纯化的重组蛋白用蛋白印迹（Western Blotting）进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-30a（＋）-Ta GST构建成功。SDS—PAGE结果表明，目的基因在大肠埃希菌BL-21／DE3中获得高效表达，经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别，表明其具有免疫原性；并且能识别感染了亚洲牛带绦虫的猪血清和亚洲牛带绦虫患者血清，表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫成虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达。
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