作者：蔡继峰; 常云峰; 廖志钢; 刘敏; 董建国; ...嗜尸性苍蝇mtdna基因序列检测种类鉴定法医物证学
摘要：目的利用线粒体DNA(mtDNA)上细胞色素氧化酶辅酶Ⅱ(COⅡ)中635bp基因序列,解决嗜尸性苍蝇及其卵和幼虫种类鉴定的难题.方法随机采集放置在呼和浩特地区室外草地家兔尸体上的嗜尸性苍蝇、幼虫、苍蝇腹中的卵.利用Chelex方法提取上述苍蝇mtDNA;通过Perkin-Elmer 9600扩增仪进行PCR扩增;琼脂糖水平电泳和银染显色技术进行扩增结果检测;PCR胶回收试剂盒纯化;ABI 377测序仪测序;DNAMAN 4.0序列分析软件,进行序列比对,截取等长度片段;MEGA2.1软件包进行序列分析和构建系统发育树.结果上述嗜尸性苍蝇mtDNA上COⅡ基因序列在双翅目嗜尸性苍蝇的种内差异均数小于1%,种间差异均数大于3%,成虫与幼虫、卵无明显差异.以此能够根据COⅡ序列差异判断两个个体是否同种.然而,对于亲缘关系非常接近的铜绿蝇和丝光绿蝇来说,由于二者的种内、种间进化分歧均数非常接近,运用上述两个片段则很难区别.结论 mtDNA上COⅡ序列分析能有效地对绝大多数嗜尸性苍蝇进行种类鉴定.该检测方法快速、简便和精确,能作为法医鉴别嗜尸性苍蝇种类的依据.
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