作者：王婷; 赖慧玲; 朱涛卵巢癌skov3细胞自噬相关基因5rna干扰免疫组织化学
摘要：目的：检测卵巢肿瘤中自噬相关基因5（Atg5）的表达情况,公共数据库分析Atg5在mRNA表达水平与患者预后的相关性。研究人卵巢癌细胞系SKOV3中Atg5下调对细胞增殖的影响。方法：收集卵巢肿瘤患者卵巢肿瘤标本共30例,对其进行Atg5的免疫组织化学染色,检测其在不同卵巢肿瘤患者中的表达情况。应用公共数据库Kaplan-Meier plots对多组卵巢癌患者mRNA表达谱分析,预测Atg5的表达水平对患者预后的影响。SKOV3细胞分为两组,阴性对照组（转染阴性对照siRNA）和实验组（转染Atg5 siRNA）。通过蛋白印记法检测、CCK-8法及克隆形成实验检测细胞转染siRNA后Atg5的表达及增殖情况。结果：免疫组织化学检测卵巢肿瘤组织Atg5表达情况,卵巢癌组阳性率（75.00%）较交界性卵巢肿瘤（40.00%）及良性卵巢肿瘤（20.00%）表达水平高,且卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组差异有统计学意义（P〈0.05）。公共数据库KaplanMeier plots表达谱芯片分析Atg5 mRNA表达水平对患者预后的影响,结果显示高表达Atg5组较低表达组预后差,差异有统计学意义〔（P=3.1e-05,HR=1.37（1.18,1.58）〕。对人卵巢癌细胞系SKOV3进行反义siRNA干扰,干扰后细胞采用CCK8法分别在不同时间点检测细胞的增殖能力,结果阴性对照组和转染Atg5 siRNA组（实验组）A450值在24 h、48 h、72 h对照组及实验组A450值分别为1.179±0.036、1.454±0.040、1.828±0.059;0.640±0.039、1.032±0.054 1.146±0.040,实验组较阴性对照组明显降低,差异有统计学意义（均P〈0.01）。结论：免疫组织化学法检测Atg5在卵巢癌中表达与良性卵巢肿瘤及交界性卵巢肿瘤相比明显升高,对公共数据库mRNA表达谱芯片的分析显示,Atg5高表达可能与卵巢癌的不良预后有关,反义干扰siRNA显著下调了Atg5水平表达的SKOV3细胞,其增殖能力受到明显抑制。
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