作者：初秋; 罗速脱氧核酶cyclind1mrna
摘要：目的：本研究针对CyclinD1mRNA设计脱氧核酶，观察其切割CyclinD1mRNA的有效性，探索脱氧核酶在乳腺癌基因治疗的可能性。方法：体外转录CyclinD1mRNA底物，设计并合成DZ（脱氧核酶）、DZs（硫代修饰脱氧核酶，序列同DZ，但两侧各有两个脱氧核苷酸进行了硫代修饰）、ASO（反义寡聚脱氧核苷酸）、无关Dz对照。体外切割CyclinD1mRNA，经转染试剂将脱氧核酶转染入乳腺癌细胞，利用RT～PCR法检测CyclinD1mRNA水平的变化，免疫细胞化学及图像分析系统检测CyclinD1蛋白质表达情况，NIT法初步估计乳腺癌细胞的生长效应。结果：Dz与DZs在体外均可切割CyclinD1mRNA底物，其切割率分别为63．2％与60．9％；经转染DZ、DZs的细胞均下降CyclinD1mRNA的水平，而且DZs的作用更强；经转染Dz与DZs的细胞均下降CyclinD1的表达，ASO也略下降CydinD1的表达；DZ、DZs有抑制细胞生长的作用。结论：本实验设计的脱氧核酶能在细胞外有效切割CyclinD1mRNA，在细胞内也能切割CyclinD1mRNA、抑制CyclinD1的表达、抑制乳腺癌细胞的生长，为乳腺癌的基因治疗提供可能性。
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