特异性脱氧核酶对喉癌真核细胞起始因子4E基因mRNA的体外切割作用

作者：滕博; 辛丁; 文连姬; 王君影; 崔树勋; 金...dna催化性真核细胞起始因子4e基因疗法喉肿瘤

摘要：目的研究特异性脱氧核酶（10-23DNAzyme）对喉癌真核细胞起始因子4E（eukaryotici nitiation factor-4E,eIF4E）基因mRNA的体外切割作用。方法设计合成针对原癌基因eIF4EmRNA编码区的1102、1289、1226位点的3个10-23DNAzyme-eIF4E,用内切酶XhoI将含有eIF4E基因mRNA的pGEM-7zf＋eIF4E质粒消化成线性。以此为模板体外转录出用[α-^32P]UTP标记的靶eIF4E基因编码区mRNA。在37℃,pH7.5,Mg^2＋离子50mmol/L条件下,分别与3个10-23DNAzyme-eIF4E（1μmol/L）混合进行切割反应,并比较不同Mg^2＋离子浓度下酶对靶mRNA的切割活性。反应产物在8%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离并行放射自显影,应用凝胶成像分析仪评价酶的切割效率。结果在设定条件下,3个10-23DNAzyme-eIF4E对eIF4E基因mRNA均有切割活性,且随着Mg^2＋浓度越高,酶的切割活性增强。结论3个10-23DNAzyme-eIF4E能有效切割eIF4E基因编码区mRNA,且切割效率与Mg^2＋浓度有关。

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