作者：别闯南; 王权; 白雪瑞; 凌娇; 李恭贺; 蒋...环介导等温扩增溶血素a基因多重毒素创伤弧菌
摘要：为建立快速检测致病性创伤弧菌两种毒素的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）方法,分别以创伤弧菌溶血素A基因（hemolysin gene A,HA）和多重毒素（repeats in toxin,RTX）毒力基因的保守序列作为靶序列设计内、外引物。通过肉眼观察白色沉淀初步判断检测结果,通过琼脂糖电泳最终确定检测结果。LAMP检测创伤弧菌的两种基因的灵敏度都达到10 CFU/mL。特异性结果表明致病性创伤弧菌的结果为阳性,而其他几种常见弧菌和食源菌检测结果为阴性。在人工模拟样品检测中,LAMP结果显示,采用水煮法提取DNA,从样品处理到报告结果耗时1.5 h,鱼肉中创伤弧菌的检出限为1×10~2 CFU/g（RTX）和1×10~4 CFU/g（HA）;采用同样方法提取DNA进行普通PCR,其检出限为1×10~3 CFU/g（RTX）和1×10~4 CFU/g（HA）,耗时4 h。结果表明,本研究建立的LAMP方法检测创伤弧菌两种毒力基因时具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点,适用于食品和养殖业中的现场快速检测。
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