作者：郭敏; 徐梅倩; 岳城; 何国声大片吸虫cdna文库组织蛋白酶l1
摘要：目的 大片吸虫cDNA文库的构建及组织蛋白酶L1（Fasciola gigantica Cathepsin L1，FgCL1）基因的克隆。方法 提取大片吸虫成虫总RNA，运用SMART技术构建大片吸虫cDNA文库。根据文献设计并合成PCR引物，从上述文库中克隆大片吸虫rgCL1基因，定向克隆至原核表达载体pET28a中。结果 文库容量为2．08×106pfu／mL，重组率为98％。扩增后的文库滴度为6．23×109pfu／mL，插入片段平均大小约为1000bp。应用两个已知基因（FgCL1 FgGST）从文库中成功钓取到相应的全长基因。将含有FgCL1的阳性克隆测序，用Genebank Blast进行序列比较，证实为FgCL1基因。结论 成功构建了cDNA文库，提供筛选大片吸虫基因资源；从该文库中克隆出FgCL1，为进一步表达该基因，研制诊断试剂盒创造了条件。
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