作者：巴音查汗; 米晓云; 福本新屋; 玄学南吉氏巴贝斯虫elisaifat
摘要：利用抗体法(picoBlueTMImmunscreening Kit,应用B.gibsoni感染血清)从犬吉氏巴贝斯虫(B.gibsoni)裂殖子mRNA制备的吉氏巴贝斯虫cDNA文库中进行免疫筛选,选出目的基因相cDN段(阳性克隆).测序验证后将该cDNA(基因)克隆至原核表达载体pGEX-4T-3,构建重组质粒,在大肠杆菌E.coli(DH5a)中以GST融合蛋白的形式表达(SDS-PAGE分析证明);表达产物为130kDa的可溶性融合蛋白.免疫学分析(Western blot和ELISA)结果表明,犬吉氏巴贝斯虫重组GST-P130kDa融合蛋白(rBg GST-P130kDa)能与犬吉氏巴贝斯虫(B.gibsoni)感染血清起反应,且与犬巴贝斯虫(B.canis)无交叉反应.本试验利用犬吉氏巴贝斯虫重组BgGST-P130kDa融合蛋白(作为重组抗原)检测巴西(n=310)、日本(n=100)和中国(n=114,n=30)等国随机采集的自然感染狗血清,其结果为巴西狗血清阳性率为55%、日本为8%、中国为1～9%;其结果与间接荧光抗体法(IFAT)结果为一致(作为验证).结果表明重组BgGST-P130kDa融合蛋白具有较强的免疫原性和特异性,可用于吉氏巴贝斯虫病的诊断,这为吉氏巴贝斯虫病的早期诊断和深入研究犬吉氏巴贝斯虫病的特异性重组抗原及重组疫苗奠定基础.
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
