作者：吴跃章; Zeinab; Abdelrahaman; 千文; 池...重组人cyp2c9酵母微粒体玻璃珠双氯芬酸
摘要：目的通过优化玻璃珠破碎法的条件,制备最具活性的重组人CYP2C9酵母微粒体,从而为建立更加灵敏快捷的体外代谢筛选模型提供依据。方法利用玻璃珠破碎的方法,制备重组人CYP2C9酵母微粒体。通过改变涡旋振荡次数和玻璃珠用量,优化制备微粒体的条件。用Lowry法测定微粒体中的蛋白含量,用CYP2C9的典型底物双氯芬酸与微粒体进行反应,以单位时间(h)内单位蛋白(mg/ml)所对应的双氯芬酸代谢物4-羟基双氯芬酸的生成量来确定微粒体的蛋白活性。结果随着涡旋振荡次数和玻璃珠用量的增加,所制备微粒体蛋白的含量增加。当涡旋振荡次数为30次(每次涡旋振荡30s,冷却60s),玻璃珠用量为0.75g时,代谢物生成量和单位时间单位蛋白所对应代谢物生成量最大,分别为1.21μg和0.06μg/[(mg/ml)·h]。结论玻璃珠破碎法制备重组人CYP2C9酵母微粒体的最佳条件为涡旋振荡30次(每次涡旋振荡30s,冷却60s)和0.75g玻璃珠。
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