作者：刘京; 于田田; 陈玉华; 李敬达; 陶娅妮; ...真核表达载体构建毕赤酵母动脉粥样硬化
摘要：目的构建血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）真核表达载体,筛选高表达菌株,为体外获得有活性重组蛋白奠定基础。方法 以实验室保存的含有人源LOX-1基因的质粒为模板PCR扩增LOX-1基因,经过TA克隆后亚克隆至酵母表达载体p PICZαA,将获得的重组质粒电转化至毕赤酵母X-33,利用原位双膜法快速检测阳性高表达菌株,最后经过甲醇诱导,采用Western blot检测LOX-1的表达。结果 成功构建LOX-1真核表达载体,双膜法筛选到高表达菌株;Western blot结果显示,LOX-1在上清中得到表达。结论 LOX-1基因在毕赤酵母细胞上清中得到表达,为体外获得活性重组蛋白和研究其致动脉粥样硬化功能奠定基础。
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