作者：王海燕; 何梦雅; 张荣光; 余飞艳; 陈帅印...幽门螺杆菌金属蛋白酶基因克隆融合表达麦芽糖结合蛋白
摘要：目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)金属蛋白酶(metalloprotease, Mtp)基因mtp与麦芽糖结合蛋白基因mbp融合表达载体,诱导Mtp重组表达并纯化表达产物,为Hp致病机制和疫苗研究奠定基础。方法应用PCR从Hp郑州分离株MEL-Hp27的DNA扩增mtp基因,经纯化回收后与克隆载体pMD19-T连接,并进行测序验证。对重组质粒pMD19-T-mtp双酶切,酶切目的片段克隆至表达载体pMAL-c2X,然后用重组质粒pMAL-mtp转化大肠埃希菌(E.coli TB1)。从大肠埃希菌重组子中提取重组质粒,进行酶切和测序鉴定。用分光光度计测定重组菌的生长曲线。用IPTG诱导mtp表达,用SDS-PAGE法分析表达产物,并用Amylose树脂预装柱纯化Mtp蛋白。结果 PCR扩增的mtp基因片段长度为621 bp,重组菌株的酶切和测序鉴定正确;重组菌生长曲线显示重组质粒的转入对受体菌的生长无显著影响;Mtp诱导表达和纯化产物的SDS-PAGE显示,Mtp表达产物为相对分子质量为66.4×10^3的水溶性融合蛋白(rMtp),纯化产物的纯度约为85.6%。结论成功构建mtp基因与麦芽糖结合蛋白mbp基合表达载体,并纯化制备了重组蛋白,为探索Mtp在Hp感染发病机制和抗Hp感染疫苗研究奠定了基础。
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