作者：李利山; 王晓岑; 杨升; 宫鹏涛; 李建华; ...新孢子虫原核表达纯化
摘要：目的获取新孢子虫致密颗粒7和鼠白介素18(NcGRA7-MouseIL-18)重组基因,表达NcGRA7-MouseIL-18融合蛋白并进行纯化。方法以新孢子虫的cDNA和鼠巨噬细胞的cDNA为模板,采用PCR技术及无缝克隆技术(In-Fusion Cloning)扩增NcGRA7-MouseIL-18基因片段,构建pET-32a-NcGRA7-MouseIL-18重组表达质粒,转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达目的蛋白NcGRA7-MouseIL-18,进行SDS-PAGE和Western blot分析;采用Ni-NTA亲和层析柱纯化NcGRA7-MouseIL-18蛋白,并纯化蛋白进行Western blot鉴定。结果酶切和基因测序鉴定质粒pET-32a-NcGRA7-MouseIL-18构建正确,表达带His标签的相对分子质量约70×10~3的可溶性NcGRA7-MouseIL-18蛋白,与预期值相符;未纯化和纯化的融合蛋白均可被鼠抗His单抗识别。结论成功构建了pET-32a-NcGRA7-MouseIL-18重组质粒,表达的NcGRA7-MouseIL-18融合蛋白具有反应原性。
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