作者：李健蕊; 董飚; 马雪梅; 彭宗根丙型肝炎病毒解旋酶荧光共振能量转移高通量筛选模型
摘要：目的建立丙型肝炎病毒（HCV）解旋酶抑制剂高通量筛选模型,筛选抗HCV药物。方法应用荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer,FRET）法检测丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS3的解旋酶活性,并对反应温度、反应缓冲液pH、解旋酶浓度、底物浓度、ATP浓度等反应条件进行优化,建立筛选模型优化反应体系,通过Doxorubicin对反应体系进行验证。结果优化的解旋酶模型测定反应体系和条件为：反应温度为22℃,反应缓冲液pH值为7,酶浓度为5μg/ml,底物浓度为5nmol/L,ATP浓度为2.5mmol/L。用优化的FRET测得2μmol/L Doxorubicin对解旋酶的抑制率为（59.1±17.4）%。结论建立了HCV解旋酶抑制剂FRET法高通量筛选模型,为新型HCV NS3解旋酶抑制剂的研发奠定了基础。
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