作者：叶倩宸; 陈业伟; 傅政民; 李晓钿; 冯琳远...人巨细胞病毒免疫共沉淀
摘要：目的：探究干扰素诱导蛋白N-Myc相互作用因子（Nmi）与人巨细胞病毒（HCMV）皮层蛋白UL23相互作用的关键区域。方法：根据前期实验结果,分别将10个不同截短突变型的Nmi构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,转化到大肠杆菌Rosetta（DE3）感受态细胞中,表达并纯化出带有GST标签的融合蛋白,利用GST-pulldown的方法探究Nmi与UL23相互作用的区域。根据GST-Pulldown实验结果,用同源重组的方法在真核表达载体pc DNA4-Myc上分别构建3个缺失突变型Nmi。将实验组和对照组的Nmi分别与含有Flag标签的UL23质粒共转染至He La细胞中,通过免疫共沉淀法进一步研究Nmi与UL23的相互作用区域。结果：（1）10个截短突变型Nmi与GST基因融合的原核表达载体构建成功;（2）3个缺失突变型Nmi与Myc基因融合的真核表达载体构建成功;（3）GST-pulldown实验证明Nmi与UL23相互作用位点位于Nmi上的第192~202位氨基酸区域;（4）免疫共沉淀法确认Nmi的第192~202位氨基酸区域是与UL23相互作用的区域,与GST-pulldown实验结果一致。结论：Nmi与UL23相互作用的区域位于Nmi上第192~202位氨基酸区域。这为阐明UL23帮助HCMV在宿主体内潜伏的分子机理提供了基础。
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