作者：张建新; 时冉冉乳头瘤病毒结合因子表位细胞毒性t淋巴细胞骨肉瘤
摘要：目的：观察骨肉瘤高表达抗原乳头瘤病毒结合因子（PBF）的改造表位是否有HLA-A2限制性抗肿瘤能力,开发基于骨肉瘤的多肽免疫治疗。方法：首先运用RT-PCR和Western blot方法检测PBF在骨肉瘤细胞系U2OS和Saos-2的表达情况。然后通过Net CTL 1.2、SYFPEITHI和IEDB软件预测打分来选取PBF的HLA-A2限制性表位。替换PBF抗原锚定位点氨基酸获得改造肽。候选表位肽的合成方法是标准的Fmoc化学合成法,结合力实验用于检测候选表位与T2A2细胞表面HLA-A2分子的结合能力,ELISPOT实验检测候选表位肽诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）分泌干扰素γ（IFN-γ）的能力,乳酸脱氧酶（LDH）释放实验和羧基荧光素琥珀酰亚胺脂（CFSE）细胞毒实验检测候选肽诱导CTL的能力。结果：PBF在骨肉瘤细胞系U2OS和Saos-2均有表达,候选肽P75-1Y2L、P412-1Y、P416-1Y2L9V、P107-1Y和P435-1Y2L具有较好的结合力,且改造肽与HLA-A2的结合力高于原肽。ELISPOT实验结果显示表位肽P412、P412-1Y、P416、P416-1Y2L9V和P435-1Y2L诱导的CTL具有分泌IFN-γ的能力;P412-1Y和P416-1Y2L9V诱导特异性T细胞免疫分泌的IFN-γ略高于原肽。LDH释放实验和CFSE细胞毒实验结果显示表位P412、P412-1Y、P416和P416-1Y2L9V对U2OS细胞均有一定的杀伤作用,P412-1Y和P416-1Y2L9V特异性CTLs对U2OS细胞杀伤率高于原肽特异性CTLs。结论：PBF抗原改造表位P412-1Y和P416-1Y2L9V与天然表位P412和P416相比有更高的HLA-A2分子亲和力,保留了原有的免疫原性,并且改造肽抗肿瘤免疫效应强于天然表位。P412-1Y和P416-1Y2L9V是优秀的PBF抗原的HLA-A＊0201限制性CTL候选表位,可以成为新的抗肿瘤多肽免疫治疗疫苗的候选表位。
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