作者：李开济; 田增有; 田景瑞; 门秀丽; 吴静实时定量逆转录pcr标准化方法内参照基因
摘要：目的：实时定量逆转录PCR（RT-q PCR）结果的标准化对于保证最终结果的准确性尤其重要。常用的标准化方法包括用加入的核酸量校正（ΔCt法）、用单个内参照基因校正（ΔΔCt法）和用统计学软件计算多个内参照基因的几何平均值进行校正。我们在db/db小鼠肝脏中对各种校正方法进行评估。方法：用ge Norm和NormFinder两种软件评估ACTB、e IF5、GAPDH、HMBS、HPRT1、Polr2A和RPLP0共7个内参照基因,以肝脏脂质合成相关基因Thrsp、SCD、SREBP1c和FAS作为目的基因。结果：应用ΔCt法,db/db小鼠肝脏中所有目的基因及GAPDH的表达显著升高（P〈0.05）。ge Norm计算认为ACTB和HMBS最稳定。Norm Finder计算认为ACTB最稳定,而GAPDH和RPLP0为最佳组合。以单个基因ACTB或RPLP0,以及ACTB与HMBS,或GAPDH与RPLP0的几何平均值进行校正,db/db小鼠肝脏中除SREBP1c以外,Thrsp、SCD1和FAS的表达均升高（P〈0.05）。结论：用ΔCt法校正RTq PCR的结果稳定并具有生物学意义。统计学软件ge Norm或Norm Finder应与ΔCt法整合使用。
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