作者：王斌; 李悦山多柔比星硫氧还蛋白硝基化心肌细胞细胞凋亡
摘要：目的：探讨硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）硝基化在多柔比星诱导的乳鼠心肌细胞凋亡过程中的作用。方法：体外分离培养新生sD大鼠心肌细胞，直接给予多柔比星刺激和预孵育过氧亚硝基阴离子（ONOO-）清除剂锰（III）四（1·甲基4-吡啶基）卟啉（MnTMPyP）后再给予多柔比星刺激。MTY检测细胞存活率，细胞凋亡荧光Hoechst33258试剂盒检测细胞凋亡情况，分光光度法检测caspase-3的活性，Western blotting法检测聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶1剪切片段[cleavedpoly（ADP-ribose）polymerase-1，cleavedPARP．1]、凋亡信号调节激酶1（apoptosissigual-regulatingkinase1，ASK1）、磷酸化ASK1（p-ASK1）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38mitogen．activated proteinki—nase，p38MAPK）和磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）的表达，免疫沉淀法检测Trx-NT和Trx-硝基酪氨酸的形成。结果：给予多柔比星后，心肌细胞Hoechst荧光染色观察到明显凋亡，MnTMPyP预保护后，凋亡情况减轻。多柔比星组与正常组相比，Trx硝基化水平升高，caspase-3活性、cleavedPARP-1和P．p38MAPK表达增加（P〈0．05），Trx．ASK1和p-ASK1表达减少（P〈0．05）。MnTMPyP预保护组与多柔比星组相比，m硝基化水平降低（P〈0．05），caspase-3活性、cleavedPARP一1和p-p38MAPK表达降低（P〈0．05），1h—ASK1和P．ASK1表达增加（P〈0．05）。结论：多柔比星刺激心肌细胞后，1h硝基化水平和细胞凋亡明显增加；给予ONOO一清除剂MnTMPyP后，’IIⅨ硝基化程度和凋亡情况得到明显改善。Trx硝基化可能是多柔比星诱导心肌细胞凋亡的机制之一。
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