作者：刘美琴; 周珺; 马亮; 国风前列腺肿瘤maspin蛋白转录因子rela耐药性
摘要：目的：探讨maspin影响前列腺癌细胞生物学行为的作用机制。方法：设计并合成靶向maspin基因的特异性shRNA，构建靶向masp／n的shRNA慢病毒表达质粒并进行细胞转染。采用qRT—PCR和Westernblot-ring法检测PC-3细胞转染重组质粒后maspinmRNA和蛋白质水平的变化以建立稳定转染maspin—shRNA的细胞系。采用qRT—PCR检测转染重组质粒对Pc-3细胞中凋亡相关基因的影响。采用xCELLigence系统实时动态观察转染重组质粒前后细胞的生长并计算倍增时间，结合流式细胞术检测蛋白酶体抑制剂细胞毒性作用在细胞转染前后的变化。采用Westernblotting法检测蛋白酶体抑制剂对核因子KB家族成员ReiA和RelB表达的影响。结果：成功构建靶向masp／n的shRNA慢病毒表达质粒pLL3．7-siMaspin。利用慢病毒表达系统转染并通过极限稀释法得到单克隆转染细胞PC-3-siMaspin。PC-3-siMaspin细胞的倍增时间为26．83h，而Pc-3-control细胞为37．95h。PC-3-siMaspin细胞中bcl-2和A20mRNA表达水平上调；而bax和him的表达水平下调。蛋白酶体抑制剂MG-132作用Pc-3-control和Pc-3-siMaspin细胞8h后细胞死亡率分别为27．1％±5．6％和7．5％±2．3％，24h为24．2％±3．7％和8．2％4-2．5％，36h为28．7％±3．7％和7．6％±2．5％。PC-3-control细胞在MG-132作用下RelA的表达逐渐下调，而Pc-3-siMaspin细胞中RelA的表达无明显变化。结论：在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株Pc-3中maspin呈高表达。Maspin表达沉默显著缩短了前列腺癌细胞的倍增时间，加快了细胞的生长与增殖。Maspln表达沉默显著下调了PC-3细胞对MG-132的敏感性，并与RelA降解的缺失相关。
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