作者:黄海高; 李悦山多柔比星硫氧还蛋白凋亡信号调节激酶1心肌细胞细胞凋亡
摘要:目的: 探讨硫氧还蛋白-凋亡信号调节激酶1(Trx-ASK1)在多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法: 体外分离原代新生SD大鼠心肌细胞,待细胞可见搏动率大于95%、预孵育抗氧化剂ebselen(Ebs)后,给予DOX(1 μmol/L)作用24 h。 MTT检测细胞存活率;活性氧簇(ROS)敏感的荧光探针2',7'-二氯二氢荧光素二乙酯 (H2DCFDA)检测细胞内ROS含量;细胞凋亡荧光Hoechst 33258试剂盒进行凋亡检测;凋亡试剂盒检测caspase-3的活性;Western blotting法检测聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶1 、ASK1、p-ASK1、p38和p-p38;免疫沉淀法检测Trx-ASK1是否发生分离。结果: 乳鼠心肌细胞给予DOX后细胞内ROS量明显增多,荧光染色可以观察到明显凋亡,给予抗氧化剂Ebs后凋亡得到明显改善。与正常组相比,凋亡组caspase-3活性明显升高(P〈0.01);PARP1、ASK1和p38等蛋白活化形式表达增加(P〈0.01);Trx-ASK1的分离显著增加(P〈0.01)。Ebs保护组与凋亡组相比,caspase-3活性明显降低(P〈0.05);PARP1、ASK1和p38等蛋白活化形式表达减少(P〈0.01);Trx-ASK1分离明显减少(P〈0.05)。结论: 给予DOX后心肌细胞可发生明显的凋亡,Trx与ASK1发生了一定程度的分离,从而使得ASK1介导的凋亡信号通路参与了该凋亡过程,给予Ebs后凋亡得到明显改善。本研究充分说明Trx-ASK1在DOX诱导心肌细胞凋亡过程中发挥着重要的作用,这将有助于进一步研究DOX诱导心肌细胞凋亡的机制。
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