作者：仲维高; 杨艳; 曾晓荣; 崔跃; 孔天翰咖啡因钾通道钙激活兰尼定猪冠状动脉平滑肌细胞
摘要：目的：利用膜片钳技术，研究咖啡因对钙激活钾通道（calcium-activated potassium channel，KCa）的作用机制，及咖啡因存在时兰尼定（ryanodine）对KCa的影响以阐明冠状动脉平滑肌的调控机制。方法：采用急性酶分离方法，应用膜片钳单通道电流记录技术记录猪冠状动脉平滑肌钿胞上KCa电流活动。电流信号经放大、滤波及A／D、D／A转换后输入微机进行采样和储存。应用PCLAMP 9．0软件系统进行数据采集及分析。结果：在内面向外式（inside—out）膜片下，咖啡因（0．1、0．5、1．0、5．0mmot／L）可浓度依赖性地增加通道开放概率，而对电流幅值无明显影响，开放概率增加是通过明显缩短平均关闭时间实现的（n=8，P〈0．01）；洗去药物后通道活性可以恢复到对照水平；5．0mmol／L咖啡因对KCa激活作用最大（P〈0．01）。在细胞贴附式（cell—attached）膜片上，咖啡因激活KCa后，ryanodine（10—40μmol／L）浓度依赖性地抑制通道开放概率，开放时间缩短，关闭时间延长，对电流幅度无明显影响。结论：在inside—out膜片下，咖啡因能够直接激活猪冠状动脉平滑肌细胞KCa通道。在cell—attached构型上，ryanodine可通过胞内一定的信号通路浓度依赖性间接抑制咖啡因对KCa激活。
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