作者：李雅林; 白波; 陈京; 刘有旺; 刘海青; 路...受体阿片样重组真核表达载体hek293细胞
摘要：目的：构建与海肾荧光素酶（renilla luciferase，Rluc）融合的人κ型阿片受体（kappa opioid receptor，KOR）的真核表达载体，用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法：以质粒pcD．NA3．1-hKOR为模板，PCR方法扩增人KOR。扩增的人KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切，同时用这2种酶双酶切质粒pRluc—pcDNA3．1。然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10。挑取菌落培养，提取质粒，然后进行酶切鉴定，最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾（human embryonic kidney293，HEK293）细胞，免疫荧光染色，共聚焦显微镜观察。结果：扩增出了1条约1．2kb的片段，与预期的人KOR大小相符，质粒酶切结果显示重组质粒pRluc—hKOR～peDNA3．1被切成2条片段，其中1条为pRluc—pcDNA3．1载体大小，另1条为目的片段大小。经测序鉴定，序列与GenBank（NM_000912）中的序列高度同源。共聚焦显微镜观察显示，阿片受体主要表达在细胞膜上。结论：构建成功了pRluc—hKOR—pcDNA3．1重组真核表达载体，此表达载体可用于检测人KOR与其它受体之间的相互作用。
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