作者：李方成; 李军亮; 刘然义; 吴中华; 张培峰...葡萄糖转运体1真核表达脑缺血293细胞免疫组织化学
摘要：目的:构建大鼠葡萄糖转运体1(GLUT1)的真核表达载体.方法:以RT-PCR方法从大鼠脑组织中获取GLUT1全长cDN段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Glut1,随后用lipofectamineTM 2000介导转染HEK293细胞,以RT-PCR法检测重组质粒在mRNA水平的表达,以免疫组化的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达.结果:以构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Glut1转染293细胞后,在基因及蛋白表达水平均检测到了葡萄糖转运体1的表达.结论:成功构建了携带大鼠葡萄糖转运体1的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Glut1,且证实其可在293细胞中成功表达目的基因,为进一步研究外源性GLUT1表达对缺血缺氧脑细胞的保护作用奠定了基础.
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