作者：杨林林; 孙卓; 杨利民; 韩梅狭叶柴胡内参基因实时荧光定量pcr关键酶基因组织表达
摘要：目的筛选适宜狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium组织表达分析的内参基因,分析柴胡皂苷合成关键酶基因的组织表达模式。方法选取Actin、α-tubulin、β-tubulin、Cyclophilin、EF-1α5个常用的内参基因作为候选,分别使用Delta CT、Best Keeper、Norm Finder、ge Norm软件对各候选内参基因的稳定性进行评价,并对候选内参基因的稳定性进行验证,利用实时荧光定量PCR技术,以筛选得到的内参基因分析狭叶柴胡根、茎、叶、果中柴胡皂苷合成关键酶基因HMGR、IPPI、FPS、SS、β-AS基因的组织表达模式。结果候选内参基因平均表达稳定性由高到低排序为β-tubulin〉Cyclophilin〉Actin〉EF-1α〉α-tubulin,β-tubulin是狭叶柴胡基因组织表达分析的适宜内参基因。HMGR基因表达量由高到低为根〉茎/果〉叶,IPPI基因表达量由高到低为根〉茎〉果〉叶,FPS基因表达量由高到低为叶〉根〉茎〉果,SS基因表达量由高到低为叶〉果〉根〉茎,β-AS基因表达量高低为叶〉根〉果〉茎,其中HMGR与IPPI及FPS与β-AS基因的表达显著呈正相关（P〈0.05）。结论筛选得到了狭叶柴胡不同组织基因表达分析的最适内参基因为β-tubulin,为狭叶柴胡基因组织表达分析奠定方法学基础。柴胡皂苷合成关键酶基因有不同的组织表达模式,可能参与调控狭叶柴胡不同组织中柴胡皂苷合成与积累的流向。
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