作者：于平; 徐超超; 朱鹏志枯草芽孢杆菌原生质体制备原生质体再生形成率再生率渗透压稳定剂
摘要：原生质体融合技术是一种重要的微生物育种方法. 以能产碱性果胶酶的枯草芽孢杆菌ZGL14为出发菌株，探讨影响其原生质体制备和再生的主要因素. 通过研究菌龄、溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂的pH值、再生培养基类型和培养方式等对枯草芽孢杆菌ZGL14原生质体制备与再生的影响，确定其最优化条件. 结果显示：枯草芽孢杆菌ZGL14原生质体制备的最优条件为菌龄9 h，溶菌酶浓度0.2 mg/mL，酶解时间10 min，酶解温度32 ℃，渗透压稳定剂的pH值 7.0. 在此条件下，枯草芽孢杆菌ZGL14原生质体的形成率为98%，再生率达30%. 枯草芽孢杆菌ZGL14原生质体再生培养基以琥珀酸钠作为渗透压稳定剂并结合Ca2＋再生效果较好，再生方式以单层培养较好. 本研究获得了枯草芽孢杆菌ZGL14原生质体制备和再生的最佳条件，可为实现其融合育种提供技术支持. （图7 表1 参14）
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