作者：熊真真; 陈小雁; 尤姗姗; 石晓钟骨骼肌转录调控tceal7
摘要：目的在胚胎发育及成年骨骼肌受损修复过程中,骨骼肌的形成需要成肌细胞彼此融合形成肌小管,肌小管进一步组装成多核肌纤维。整个骨骼肌的形成过程受MRFs(myogenic regulatory factors)的调控,其家族成员主要包括MyoD(myoblast determination protein),Myf5(myogenic factor 5),Mrf4(musclespecific regulatory factor 4)以及MyoG(myogenin)。Tcea17(transcription elongation factor A(SII)-like 7)作为Myod直接靶向的下游调控因子之一,它在骨骼肌分化期间表达增强,且过量表达Tceal7会增强C2C12细胞的分化能力,降低其增殖能力。Tceal7基因的启动子片段约为0.7 kb,其能驱动LacZ报告基因在发育的骨骼肌谱系中表达,表达模式与内源基因表达的模式相似。生物学信息分析显示0.7 kb启动子含有大量高度保守的转录因子结合序列,包括E-box序列、MEF2序列及CRE序列。其中,E-box序列一共有5个,突变分析和转录分析表明E1-box和E4-box序列最为重要。但是MEF2序列和CRE序列在Tceal7基因表达调控中的功能仍未阐明。方法利用生物学信息分析,DNA位点突变分析,转录激活分析,以及ChIP分析等生物学技术从分子水平揭示肌细胞中Tceal7基因表达的转录调控机制。结果突变启动子的CRE位点与MEF2位点序列均能降低0.7 kb-Luc报告基因活性,且二者降低程度分别与突变其邻近El-box序列、E4-box序列类似;Forskolin处理细胞后,胞质内的cAMP水平增高,转录因子Crebl被活化,由胞质入核后结合CRE激活0.7 kb-Luc报告基因,且随着浓度的增加可激活至4倍,呈现出浓度依赖性;过量表达Mef2c也同样可激活0.7 kb-Luc报告基因,随着浓度的增加可激活至6倍。结论 Myod与共激活因子Crebl和Mef2c协同调控Tceal7的表达。
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