作者：闫志平; 苏冠月; 冯唐; 沈阳; 曾烨; 刘肖...剪切力肝细胞肝癌自噬rhoa
摘要：目的自噬是细胞内形成自噬体,包裹受损的细胞器和蛋白质,进而与溶酶体融合,将自噬底物降解成小分子以重新利用的生物学过程。研究表明,力学刺激能够诱导哺乳动物细胞自噬,但其具体分子机制并不清楚。本研究的目的是探究流体剪切力(fluid shear stress,FSS)对肝癌细胞自噬的影响及分子机制。方法采用蠕动泵和流动腔系统结合,在体外对肝癌细胞HepG2精确地加载FSS。利用透射电镜、免疫荧光和Western blot技术检测自噬体形成和自噬分子标志物LC3B和p62的表达,明确FSS诱导肝癌细胞自噬。构建RhoA干扰和过表达的肝癌细胞株,在此基础上研究RhoA在FSS诱导肝癌细胞自噬中的作用。结果肝癌细胞加载FSS(1 dyn/cm~2,0.5 h)后,具有典型双层膜结构的自噬体的数目和LC3B的荧光聚集点相对于静态培养组明显增多,同时细胞自噬的分子标志物LC3BⅡ/Ⅰ比值明显升高,p62表达降低,说明FSS诱导肝癌细胞自噬。通过生物学信息学分析,发现临床样本的肝癌组织RhoA蛋白表达明显高于癌旁组织,分子功能富集分析发现RhoA蛋白表达与自噬相关分子聚类呈正相关。成功构建RhoA敲减和过表达的细胞株,敲减RhoA后,FSS诱导的自噬分子标志物LC3BⅡ/Ⅰ比值降低,LC3B的荧光聚集点和自噬体数目明显减少;过表达RhoA后,FSS诱导的自噬分子标志物LC3BⅡ/Ⅰ比值进一步升高,LC3B的荧光聚集点和自噬体数目进一步增多,说明RhoA介导FSS诱导的肝癌细胞自噬。结论 RhoA调控FSS诱导的肝癌细胞自噬。
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