作者：王凯琳 胡乔木 陈松林半滑舌鳎性别相关基因csfr2重组蛋白生物活性
摘要：通过对半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）进行全基因组及转录组测序，预测了一个半滑舌鳎性别相关基因CSFR2，目前已对该基因进行了克隆和表达分析。为进一步研究CSFR2基因的功能，本研究从蛋白层面入手，构建了原核表达载体pET-32a—CSFR2，转化到大肠杆菌Ecoli进行诱导表达，用HisTrap进行蛋白纯化，SDS-PAGE电泳检测诱导及纯化产物，并将表达纯化的CSFR2蛋白注射1龄半滑舌鳎精巢。由于CSFR2是一个性别相关基因，因此无法通过免疫反应来直接检测其蛋白活性，本研究通过不同时间点取样检测半滑舌鳎其他性别相关基因Cypl9a和Foxl2的表达量变化，来间接反应CSFR2蛋白的活性及功能。实验结果显示，重组蛋白能够进入到活体细胞内并发挥一定作用，在6—72h内对性别相关基因Cypl9a和Foxl2的表达有上调作用，说明CSFR2蛋白具有生物活性，并能调节其他性别相关基因的表达量，间接促进雄激素转化为雌激素。本研究进一步了解CSFR2基因在半滑舌鳎性别决定与分化中的作用，可为半滑舌鳎性别控制提供理论依据，在人工诱导鱼类性逆转方面有重要应用价值。此外，本研究为蛋白活性验证提供了一种新方法。
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