作者：刘红亮; 李霞; 吴先闯; 王明丽; 刘广超; ...cd40配体逆转录聚合酶链反应nih3t3流式细胞术
摘要：目的：扩增人CD40L基因并在细胞膜上表达，建立一种不需蛋白纯化获得人CD40L的简单方法，为进一步研究其在肿瘤治疗中的作用及机制奠定基础。方法：利用梯度RT-PCR从Jurkat细胞中扩增CD40L基因，测序证明序列正确后构建pcDNA3.1-40L真核表达载体，转染NIH3T3细胞，流式细胞仪检测目的基因的表达。结果：从Jurkat细胞内成功扩增人CD40L基因，筛选到一个序列无误的克隆；成功构建pcDNA3.1-40L真核表达载体；经转染NIH3T3细胞和G418初步筛选，流式细胞检测证明约41％的NIH3T3细胞膜上有CD40L基因表达。结论：利用RT-PCR技术可以从Jurkat细胞内扩增CD40L基因，利用pcDNA3.1表达载体可以实现人CD40L基因在NIH3T3细胞膜上的表达。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
