作者：何永林; 朱道银; 伊正君; 杨春; 徐蕾颗粒溶素真核表达质粒分泌表达
摘要：目的：构建能分泌表达人9ku颗粒溶素（granulysin）的真核质粒，为下一步利用颗粒溶素基因治疗肿瘤奠定基础．方法：以含有颗粒溶素cDNA序列的质粒为模板，通过聚合酶链反应（PCR）扩增获得含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段后，定向插入真核表达载体pBudCE4．1中，获得重组表达质粒pBudCE4．1-S9K，通过PCR，双酶切及插入片段序列测定对重组质粒进行鉴定；采用RT—PCR，免疫细胞化学与Dot—ELISA法检测pBudCE4．1-S9K在RAW264．7细胞的瞬时表达与分泌．结果：成功扩增出含分泌肽编码基因的9ku的颗粒溶素基因片段；经酶切，PCR及测序鉴定证明得到读码框正确的重组质粒；转染细胞证实可分泌表达9ku颗粒溶素．结论：成功构建能分泌表达9ku颗粒溶素真核表达质粒pBudCE4．1-S9K．
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