作者：王燕; 吴冰; 苏海川; 刘丽; 林芳; 张惠中stathminrna小分子干扰真核表达载体hela细胞
摘要：目的: 构建人stathmin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对HeLa细胞中stathmin基因表达的干涉作用. 方法: 将合成的siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体,酶切及测序鉴定. 脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选后RT-PCR检测其对stathmin基因mRNA的干涉效果. 结果: 经酶切及测序鉴定,成功构建siRNA真核表达载体. 经脂质体转染HeLa细胞后,RT-PCR显示所构建的干涉stathmin基因的真核表达载体成功地抑制了目的基因的表达,HeLa细胞中stathmin基因的mRNA表达水平明显降低. 结论: 成功构建了人stathmin基因的RNA干涉真核表达载体pSilencer-S1和pSilencer-S2,并在HeLa细胞中有效地发挥了对stathmin基因表达的干涉作用.
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