作者：刘继峰; 关翠萍; 唐旭; 徐田红; 许爱娥单纯疱疹病毒2型icp4实时定量荧光pcr标准曲线
摘要：目的建立实时荧光PCR定量检测单纯疱疹病毒2型（HSV2）ICP4基因的方法。方法依据HSV2 ICP4基因序列设计引物，PCR纯化后克隆到pMD-18T载体上进行测序，抽提重组质粒作为标准品。根据测序结果设计荧光定量PCR的引物和探针，质粒标准品10倍稀释后进行扩增，建立标准曲线，并进行灵敏度和可靠性分析。结果测序结果显示在扩增的PCR片段中有在A—G无和T—C的无义突变。标准品10^1以下没有检测信号，10^1具有明确的检测信号，因而检测的灵敏度为10。可靠性测定结果：10^7～10^1进行10次重复Ct值的平均值分别为14．275±0．137、17．988±0．162、22．081±0．259、25．957±0．345、29．565±0．203、33．269±0．287、37．737±0．698，变异系数分别为0．965％、0．902％、1．174％、1．329％、0．686％、0．862％、1．851％。Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系。回归系数为0．998。结论成功建立了HSV2 ICP4基因实时定量荧光PCR检测的方法，灵敏度高，重复性好，可用于HSV2 ICP4基因的定量分析。
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