作者：薛凯 李梅 刁飞扬 凌静 崔毓桂 刘嘉茵rna干扰重组腺病毒载体核受体nr4a1多囊卵巢综合征
摘要：目的：构建表达小鼠NR4A1基因的小分子干扰RNA（siRNA）重组腺病毒载体。方法：根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64bp寡核苷酸。pShuttle—H1穿梭质粒经BgtⅡ、HindⅢ双酶切后，与退火的寡核苷酸进行连接，构建穿梭质粒pSbuttle—H1-siRNA。PmeⅠ酶切pShuttle—H1-siRNA，然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy—1和穿梭质粒pShuttle—H1-siRNA转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。PacⅠ酶切线性化重组质粒pAdEasy—H1-siRNA后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增。Western blot检测NR4A1基因的表达。结果：穿梭质粒pShuttle—H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功，进一步构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体，重组腺病毒AdH1-siRNA／NR4A1感染小鼠睾丸间质细胞瘤细胞（MLTC-1）后显著抑制目的蛋白表达（抑制率为70％～90％）。结论：成功构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA／NR4A1，并在MLTC—1中验证其抑制NR4A1蛋白表达，为进一步研究NR4A1基因在多囊卯巢综合征（PCOS）中的作用奠定了基础。
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